1.?；B氮法

酰基疊氮法早在1902年就被引入肽化學。因此，這種方法是最古老的冷凝方法之一。在縮肽反應過程中，氨基酸很少用疊氮法外消旋，因此這種方法被肽合成工作者廣泛采用。最近，中國學者李清庚用這種方法成功合成了一系列谷氨酰胺類抗腫瘤化合物。疊氮肽接枝分為三步。首先是羧基部分被甲酯、乙酯、芐酯等保護的肽。在室溫下進行酰肼水解，然后酰肼與亞硝酸鹽在低溫(低于-15℃)和酸性條件下反應生成疊氮化物，最后用有機堿調節(jié)酸堿度至8-9，加入氨基組分完成肽接枝反應。機理如下。

此外，還發(fā)現(xiàn)了一種磷酸鹽縮合試劑DPPA，它可以不經肼解直接由羧基變成疊氮化物。與傳統(tǒng)的疊氮法相比，它不需要酰肼中間體，簡化了反應步驟，反應條件更溫和，因此受到人們的歡迎。機理如下。

2.混合酸酐法

該方法是指將被保護氨基酸的羧基制備成高活性混合酸酐，然后與氨基縮合生成肽的方法?；旌纤狒ㄊ?0世紀50年代初發(fā)展起來的。二苯基磷酸是制備混合酸酐的主要試劑，苯甲酸次之。現(xiàn)在廣泛使用氯甲酸烷基酯，主要是氯甲酸乙酯、氯甲酸異丁酯和氯甲酸異丙酯?；旌纤狒ň哂蟹磻俣瓤?、產品純度高、收率高、經濟性好等優(yōu)點，因此深受當今制藥工作者的喜愛。南京農業(yè)大學的米鵬程等人于2007年成功合成了胸腺五肽(TP5)的中間體Fmoc-Tyr(t-Bu)-WangResin。在反應過程中，羧基組分與氯甲酸異丁酯在低溫(-15℃)下反應生成混合酸酐，然后在叔胺存在下，在堿性條件下與氨基組分反應生成肽。機理如下。

3.碳化二亞胺法

在碳二亞胺法的發(fā)展過程中，二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)首先被用于肽的合成并得到廣泛應用。DCC相對便宜，可溶于常用的肽合成試劑。然而，當使用DCC作為縮合劑時，DCC產生的DCU在水和有機溶劑中具有一定的溶解度，使得在產品純化過程中難以消除。因此，人們開發(fā)了水溶性碳二亞胺EDC來代替DCC，只需要用酸或水洗滌就可以去除反應后產生的尿素，有效地解決了這個問題。劉國渡等也用此方法合成了活性三肽囊素。碳二亞胺的縮合試劑機理如下?？s合試劑與羧基成分反應形成活性中間體，然后與氨基成分在堿性條件下反應完成肽鏈生長反應。

4.酰鹵法

這種方法類似于有機化學，用酰氯活化羧基，然后在室溫或低溫下形成酰胺是常用的方法。但是這種方法只用于試劑應用中Fmoc保護的氨基酸，因為Fmoc在酸性條件下非常穩(wěn)定，而被其他保護基團保護的氨基酸很少用這種方法合成，因為大多數(shù)學者認為酰氯法“活性過強”，容易發(fā)生外消旋等很多副反應。

5.苯并三唑型(防噴器系列)

可以說BOP是第一代苯并三唑縮合試劑，是縮合試劑的一次革命，因為它的肽接枝效率比DCC高很多，消旋化的風險明顯降低。后來，人們發(fā)現(xiàn)了同類型的縮合試劑HBTU、ByBOP、TBTU等。共同點是縮合試劑在有機堿存在下與羧基成分反應生成羧酸的苯并三唑酯活性中間體，再與氨基成分反應生成目標多肽，如下圖所示。

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