上世紀(jì)50年代以來，蛋白質(zhì)磷酸化已被生物學(xué)家視為一種動態(tài)的生物調(diào)控過程，目前，該過程已成為生物界最為廣泛和重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。大約1/3的蛋白質(zhì)被認(rèn)為是在細(xì)胞內(nèi)通過磷酸化作用進(jìn)行了修飾。蛋白磷酸化修飾與DNA損傷修復(fù)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和凋亡調(diào)控等多個生物學(xué)過程密切相關(guān)。研究磷酸鹽蛋白和多肽有助于闡明上述過程的機(jī)制，進(jìn)一步認(rèn)識生命活動的本質(zhì)。近幾年來，隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，蛋白質(zhì)磷酸化的研究得到了重視。

蛋白磷酸化在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用磷酸化多肽主要指Ser、Tyr和Thr殘基在肽鏈上的側(cè)鏈羥基被修飾為酸型磷酸酯多肽。多肽磷酸化是研究蛋白質(zhì)磷酸化過程的重要手段，因此研究蛋白質(zhì)和多肽磷酸化反應(yīng)以及確定簡單、成熟的蛋白質(zhì)磷酸化反應(yīng)具有重要意義。迄今為止，合成多肽的方法主要有后磷酸鹽改性法和單體法兩種。后磷酸法是指在樹脂上合成完多肽序列后，對其中Ser、Tyr或Thr的側(cè)鏈羥基進(jìn)行磷酸化；單體法是指將受適當(dāng)保護(hù)的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中，這比后磷酸法更簡單，已成為多肽磷酸化修飾的主要方法。

磷酸化氨基酸在單體法修飾時(shí)，由于側(cè)鏈修飾中較大的基團(tuán)產(chǎn)生的位阻，使其與肽鏈發(fā)生縮合，且以后氨基酸的引入都很困難，特別是當(dāng)含有多個磷酸化位點(diǎn)修飾時(shí)，合成就變得異常困難，最終產(chǎn)物的成分復(fù)雜，分離難度大，收率極低。所以，當(dāng)肽鏈中有多個位點(diǎn)的磷酸化時(shí)，可以考慮采用后磷酸化的方法，其合成過程主要是在多肽合成結(jié)束后，對要標(biāo)記氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基進(jìn)行選擇性的脫除，而對于Tyr,Thr可直接用側(cè)鏈不保護(hù)的氨基酸進(jìn)行反應(yīng)。在1%TFA/DCM條件下，側(cè)鏈保護(hù)基脫除可定量。在后磷酸化過程中，可采用雙芐基亞磷酰胺、四唑亞磷酰胺、四唑、聯(lián)接羥基的活性中間體，在過氧酸條件下進(jìn)行氧化，生成磷酰胺，完成反應(yīng)。

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