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LC-MS是蛋白質(zhì)表征的強(qiáng)有力工具。反向HPLC/UPLC液相分離和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是最常用的分離模式,這種分離模式也是蛋白質(zhì)除鹽的有效方法。生物制品及蛋白質(zhì)溶液經(jīng)常儲(chǔ)存在一定鹽離子濃度的緩沖溶液中,如PBS(磷酸鹽緩沖溶液)。這些鹽溶液,能和蛋白質(zhì)形成加和離子,使數(shù)據(jù)解析更加復(fù)雜,同時(shí),這些鹽類也抑制了ESI-MS分析時(shí)的離子化效率。因此,質(zhì)譜分析之前,蛋白質(zhì)的非揮發(fā)性鹽類的去除是重要的一步。沃特世公司的MassPREPTM 在線脫鹽小柱(2.1X10 mm,Part number186004032)為客戶提供了簡(jiǎn)單易行,快速(小于5分鐘的液相梯度,如圖1),及重現(xiàn)性高的有效脫鹽方法[1]。并成功應(yīng)用于12KDa~150KDa分子量范圍的完整蛋白質(zhì)的脫鹽LC-MS分析(如圖2)展示了這種除鹽柱用在細(xì)胞色素 C(分子量約12KDa),牛血清白蛋白BSA(分子量約62KDa),和IgG(分子量約150KDa)的除鹽效果,而且柱容量可高達(dá)10微克[2,3,4]。
在蛋白質(zhì)肽段及寡聚核苷酸的除鹽分析方面,OASIS HLB(Hydrophili Lipohilic Balance) 96-孔微洗脫板(Part number 186001828),是以親水(20%N-乙烯吡咯烷酮)-親脂性(80%二乙烯基苯)共聚體為填料的固相萃取96孔板[5]。乙烯吡咯烷酮使填料具有水的可浸潤(rùn)性,二乙烯基苯具有反向保留能力,所以此款產(chǎn)品對(duì)酸性和堿性的蛋白質(zhì)多肽及寡聚核苷酸均具有更高的選擇性和靈敏度-即便填料在吸附過程中干涸也不例外[5]。用此款產(chǎn)品對(duì)蛋白質(zhì)多肽及寡聚核苷酸進(jìn)行LC-MS/MS分析前的脫鹽處理,可以極大降低LC-MS/MS分析的機(jī)制效應(yīng),提高檢測(cè)靈敏度,而且其pH應(yīng)用范圍寬至1-146。OASIS HLB96-孔微洗脫板吸附寡聚核苷酸的柱容量從1pmol高至5000 pmol。
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