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首先,我們要掌握多肽以及合成工藝流程。
什么是多肽?
多肽是一種與生物體內多種細胞功能都有關系的生物活性物質,它的分子結構介于氨基酸和蛋白質之間,是由多種氨基酸按照一定的排列順序通過肽鍵結合而成的化合物。多肽是涵蓋生物體內多種細胞功能的生物活性物質的總稱,通常被采取于功能分析、抗體研究、尤其是藥物研發(fā)等方面。
多肽固相合成基本原理
先將所需合成肽鏈的羥末端氨基酸的羥基以共價鍵的結構和一個不溶性的高分子樹脂相連,再以此結合在固相載體上的氨基酸作為氨基組份經過脫去氨基保護基并同過量的活化羧基組分反應,接長肽鏈。多次(縮合→洗滌→去保護→中和及洗滌→下一輪縮合)操作,結束所需合成的肽鏈長度,最后將肽鏈從樹脂上裂解下來,經過純化等處理,即得所需的多肽。其中α-氨基用BOC(叔丁氧羰基)保護的稱之為BOC固相合成法,α-氨基用FMOC(9-芴甲氧羰基)保護的稱之為FMOC固相合成法。
多肽合成工藝流程
A:樹脂的選擇及氨基酸的固定
交聯(lián)聚苯乙烯、聚酰胺、聚乙烯一乙二醇樹脂是多肽合成的主要載體。氨基酸的固定主要是通過保護的氨基酸的羧基同樹脂的反應基團之間生成共價鍵來結束。
B:氨基、羧基、側鏈的保護及脫除
要順利合成具備特殊的氨基酸順序的多肽,必須對尚未參與生成酰胺鍵的氨基和羧基進行保護,并且對氨基酸側鏈上的活性基團也要保護,反應結束后再將保護基團除去,近幾年來,FMOC合成法獲得了豐富的采取。羧基通常用生成酯基的方法進行保護。甲酯和乙酯是逐步合成中保護羧基的常見方法。
C:成肽反應
固相中的成肽反應通常是將兩種對應的氨基被保護的及羧基被保護的氨基酸放到溶液內并不生成肽鍵,要生成酰胺鍵,通常用的方法是將羧基活化,轉變成混合酸酐、活潑酯、酰氯或用強的縮合劑(如碳二亞氨)生成對稱酸酐等方法來生成酰胺鍵。
D:裂解及合成肽鏈的純化
BOC法用TFA+HF裂解和脫側鏈保護基,FMOC法可以直接用TFA,有時候根據條件不一樣,其他堿、光解、氟離子和氫解等脫保護方法也被采取。合成肽鏈進一步的精制、分離與純化通常采取液相色譜、親和層析、毛細管電泳等。
寫到最后:
杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成業(yè)務:藥物肽、臨床肽、訂書肽、淀粉肽、醛肽、環(huán)肽、二硫鍵搭橋多肽、穿膜肽、各種抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶聯(lián)BSA和KLH抗原肽、各類酸修飾多肽、各種胺類化合物修飾多肽(苯胺、異戊胺、二乙胺)、各類榮光標記(FITC、FAM系列、DOTA、TAMRA系列、Cy系列)同位素肽等。
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