一、二硫鍵反應(yīng)條件選取

二硫鍵就是指蛋白質(zhì)或多肽分子結(jié)構(gòu)中兩個(gè)不同位點(diǎn)Cys的巰基（-SH）被氧化所產(chǎn)生的S-S共價(jià)鍵。一條多肽鏈上不一樣的位置的氨基酸中間所產(chǎn)生的二硫鍵，能夠把多肽鏈折疊成特定的空間分布。多肽分子一般來(lái)說(shuō)分子量很大，空間分布繁瑣，結(jié)構(gòu)中產(chǎn)生二硫鍵時(shí)需要兩個(gè)半胱氨酸在空間距離上非常接近。另外，多肽結(jié)構(gòu)中還原態(tài)的巰基化學(xué)特性活躍，很容易出現(xiàn)其它的副作用，同時(shí)肽鏈上其余側(cè)鏈也可能會(huì)出現(xiàn)許多修飾，所以，多肽鏈采取修飾所選擇的氧化劑和氧化條件是反應(yīng)的重要因素，反應(yīng)原理也較為復(fù)雜，既有可能是自由基反應(yīng)，也有可能是離子反應(yīng)。

反應(yīng)條件有許多種選擇，例如空氣氧化，DMSO氧化等溫和的氧化過(guò)程，或H2O2，I2，汞鹽等劇烈的反應(yīng)條件。

1、空氣氧化法：

空氣氧化法生成二硫鍵是多肽合成中最具代表性的辦法，一般是將巰基處在還原態(tài)的多肽溶解于水里，在近中性或弱堿性環(huán)境下（PH值6.5-10），反應(yīng)24個(gè)小時(shí)以上。為了降低分子相互間二硫鍵產(chǎn)生的可能性，這種方法往往需要在較低濃度的環(huán)境下完成。

2、碘氧化法：

將多肽溶解于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中，逐滴滴加10-15mol/L的碘來(lái)進(jìn)行氧化，反應(yīng)15-40min。當(dāng)多肽鏈里面含有對(duì)碘特別敏感的Tyr、Trp、Met和His的殘基時(shí)，氧化條件要非常精準(zhǔn)，氧化完成后，立即加入維生素C或硫代硫酸鈉清除過(guò)多的碘。

二、兩對(duì)及多對(duì)二硫鍵成環(huán)對(duì)策

當(dāng)序列中含有兩對(duì)或多對(duì)二硫鍵想要成環(huán)時(shí)，一般會(huì)有自然隨機(jī)成環(huán)和定點(diǎn)成環(huán)兩種情況：

1、自然隨機(jī)成環(huán)指序列當(dāng)中的Cys相互間隨意成環(huán)，與一對(duì)二硫鍵成環(huán)條件差不多；

2、定點(diǎn)成環(huán)指序列當(dāng)中的Cys根據(jù)設(shè)計(jì)要求產(chǎn)生二硫鍵，反應(yīng)過(guò)程相對(duì)來(lái)說(shuō)比較復(fù)雜。在固相合成多肽前，需提前制定幾對(duì)二硫鍵生成的順序和方法路經(jīng)，選擇適合的側(cè)鏈巰基保護(hù)基，憑借其特性的差異，逐步氧化生成兩對(duì)或多對(duì)二硫鍵。一般采用的巰基保護(hù)基有trt,Acm,Mmt,tBu,Bzl,Mob,Tmob等基團(tuán)。

相對(duì)于二對(duì)及多對(duì)二硫鍵成環(huán)的多肽，在制定好二硫鍵生成次序及Cys側(cè)鏈保護(hù)對(duì)策后，對(duì)于每一對(duì)二硫鍵成環(huán)后，都會(huì)取少部分樹(shù)脂切割，并且對(duì)切割后產(chǎn)品實(shí)施MS檢驗(yàn)。

寫(xiě)到最后:

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