1、非HPLC純化的里面有什么雜質(zhì)?

答：粗品和脫鹽等級(jí)的修飾肽中修飾肽與非修飾肽類雜質(zhì)：如非全長(zhǎng)修飾肽和修飾肽后處理的某些原材料如DTT、TFA等。

2、HPLC純化的有什么雜質(zhì)?

答：通過(guò)HPLC純化的修飾肽，仍會(huì)有很多的雜質(zhì)出現(xiàn)，這里面的雜質(zhì)通常是短肽和少許TFA。

3、多長(zhǎng)的為適合?

答：修飾肽合成必須考慮修飾肽的長(zhǎng)度，電荷，親疏水性等多種因素?？傞L(zhǎng)度愈長(zhǎng)，合成粗品的純度和產(chǎn)出率也隨之下降，純化難度系數(shù)和難以合成的概率便會(huì)更大。不過(guò)修飾肽功能區(qū)的序列是沒(méi)有辦法更改的，但為了修飾肽的圓滿合成，有時(shí)候只能在功能區(qū)的上下游添加一些輔助氨基酸，以提升修飾肽的溶解度和親疏水性。倘若修飾肽過(guò)短，合成可能會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題，首要難題是合成的修飾肽在后處理過(guò)程中具有一定的困難，5肽以內(nèi)的修飾肽，通常得有疏水的氨基酸，不然后處理難度較大。15個(gè)氨基酸殘基以下的修飾肽一般來(lái)說(shuō)可以得到令人滿意的產(chǎn)出率和得率。

4、怎樣從序列中判斷修飾肽的溶解性?

(1)修飾肽中要是富含高比例的疏水性比較強(qiáng)的氨基酸如Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp，修飾肽不容易溶解于水性溶液中或幾乎無(wú)法溶解。這種氨基酸不論是純化或合成，都可能會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題。

(2)正常情況下疏水性氨基酸的占比<50%，無(wú)法持續(xù)5個(gè)接連aa為疏水性，帶電荷的氨基酸的占比可達(dá)20%，在修飾肽的N或C短如果可以增多極性氨基酸，也能夠改善溶解性。

5、為何帶有Cys,Met,或Trp的難合成?

答：含有Cys,Met，或Trp的修飾肽無(wú)法合成，并且難以獲得純度高的產(chǎn)品。主要是由于這些基團(tuán)不太穩(wěn)定，易氧化。使用和貯存這些修飾肽都要特別注意，防止重復(fù)打開(kāi)蓋子。

6、為什么有的的合成產(chǎn)率或純度會(huì)非常低?

答：修飾肽合成與引子合成有相當(dāng)大的差異，無(wú)法合成的引子非常少，但是經(jīng)常會(huì)有無(wú)法合成的修飾肽。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr這樣的氨基酸比鄰或循環(huán)時(shí)，修飾肽鏈在合成流程中無(wú)法完全舒展溶解，合成效率降低。以下這些情況，合成效率和產(chǎn)物的純度都非常低，如：重復(fù)Pro,Ser-Ser，重復(fù)Asp，4個(gè)連續(xù)Gly等。

7、是怎樣純化的?

答：修飾肽純化一般采用反相柱(如C8，C18等)，214nm。緩沖體系一般是含TFA的溶液，pH2.0。BufferA為含0.1%TFAinddH2O，BufferB為1%TFA/ACN/pH2.0。純化之前要用BufferA溶解；倘若溶解欠佳，用BufferB溶解后，隨后用BufferA稀釋；對(duì)疏水性高的修飾肽，有時(shí)候還要添加少許的FormicAcid或醋酸。

寫(xiě)到最后:

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