固相多肽合成主要是指將受保護(hù)的氨基酸衍生物連續(xù)添加到生長(zhǎng)的肽鏈中，包括脫保護(hù)和洗滌步驟，以去除未反應(yīng)的基團(tuán)和副產(chǎn)物。如果每一步都完成了，就會(huì)形成全長(zhǎng)肽，但這種情況很難發(fā)生，因?yàn)闊o(wú)論合成方案如何優(yōu)化，總會(huì)有副作用或反應(yīng)不良，從而影響肽的純度。因此，提高肽純度是固相多肽合成應(yīng)用的關(guān)鍵點(diǎn)。

如何確定肽的純度

反向高效液相色譜法通常用于測(cè)量肽純度（RP-HPLC）和質(zhì)譜法（MS），此外，氨基酸分析也可用于計(jì)算肽的產(chǎn)量或?qū)嶋H量。

固相多肽合成（SPPS）過(guò)程中的關(guān)鍵步驟

樹脂選擇：SPPS通常與1%二乙烯基苯基苯基苯乙烯基在一起（DVB）在交聯(lián)聚苯乙烯上進(jìn)行。替代品包括聚乙二醇（PEG）衍生物、樹脂的選擇會(huì)影響合成成功率和粗糙產(chǎn)品的純度。連接到柱上的連接提供了生長(zhǎng)肽和固相載體之間的可逆連接，并確定了最終產(chǎn)品的性質(zhì)和可用的化學(xué)性質(zhì)。接頭的選擇決定了最終產(chǎn)品中的C端官能組。

偶聯(lián)化學(xué)：選擇通常取決于合成速度，合成速度快，合成速度慢（DIC、HBTU）反應(yīng)性較高(=不穩(wěn)定)的偶聯(lián)試劑（HCTU、HATU和COMU）。反應(yīng)溫度會(huì)影響偶聯(lián)化學(xué)的選擇。

反應(yīng)溫度:提高溫度可能會(huì)加速合成和純度，但并不總是如此。需要注意的是，基于微波的加熱只是加熱，微波本身對(duì)合成沒有特殊影響。

監(jiān)測(cè)脫保護(hù)：可通過(guò)實(shí)時(shí)紫外線監(jiān)測(cè)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，如脫保護(hù)步驟的效率對(duì)優(yōu)化非常重要。

雙耦合：通過(guò)雙耦合、延長(zhǎng)耦合時(shí)間或添加更多等效物來(lái)處理預(yù)測(cè)軟件確定的困難耦合。

空間位阻：偶聯(lián)試劑必須足夠快，才能引入空間位阻氨基酸。

封端:這樣做是為了阻斷偶聯(lián)反應(yīng)后任何未反應(yīng)的氨基，或?qū)⑼暾牡?/span>N-端乙酰化。對(duì)于在合成困難或長(zhǎng)肽過(guò)程中最小化缺失的產(chǎn)品和輔助凈化過(guò)程非常有用。

溶劑使用：始終使用新鮮溶劑。重復(fù)使用溶劑會(huì)降低純度。

選擇能快速合成高純度肽的多肽合成儀器

合成儀的選擇是影響如何優(yōu)化SPPS以獲得所需肽純度的主要因素之一。以下是一些建議，幫助您選擇。

1.用于篩選方法和試劑的平行反應(yīng)容器

2.脫保護(hù)監(jiān)測(cè)

3.溫度控制

4.最小交叉污染

5.稀有單體無(wú)需單次注射

寫到最后：

杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成業(yè)務(wù):藥物肽、臨床肽、訂書肽、淀粉肽、醛肽、環(huán)肽、二硫鍵搭橋多肽、穿膜肽、各種抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶聯(lián)BSA和KLH抗原肽、各類酸修飾多肽、各種胺類化合物修飾多肽(苯胺、異戊胺、二乙胺)、各類榮光標(biāo)記(FITC、FAM系列、DOTA、TAMRA系列、Cy系列)同位素肽等。

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