之前固拓小編發(fā)過一次固拓生物的#多肽切割操作流程，現在又整理了一波小知識，希望能夠幫助到大家。多肽切割在固相合成中有著很關鍵的作用，如果切割的干凈，不僅能提高收率也給純化工作帶來便捷。剛剛接觸多肽合成的小伙伴們，通常都會在切割液的選擇有許多的疑問，那么讓我們聊聊多肽切割的一些小知識。

切割（Cleavage）屬于肽合成的后處理部分，是指將已合成的肽從載體（樹脂）上切割下來。有人認為也包括脫去側鏈保護。切割及去保護是合成中最重要步驟。如果試劑和反應條件選擇不當，產物會發(fā)生不可逆的修飾而被破壞，因此在切割時應注意以下幾個問題：

1、選擇合適的試劑濃度、反應時間、溫度等條件；

2、根據合成肽氨基酸的不同而選擇合適的切割及脫保護試劑；

3、氨基酸側鏈的保護，在切割時，切割試劑或切割產物可能對一些對其敏感氨基酸側鏈造成破壞或修飾，因此，反應時要選擇合適試劑和條件，必要時，對敏感側鏈進行保護，使其遭到最小程度的破壞。

一、什么是“切割”？

固相合成結束后，如果想從樹脂上切下多肽，需要選擇合適的切割試劑，然后用冰乙醚沉淀，離心采集沉淀物，通過HPLC分離純化，冷凍干燥獲得產品。(下列切割均針對樹脂進行處理)

二、是前后切割過程

三、切割流程

準備要切割的樹脂

這里只需要樹脂里面的溶劑成分被洗滌掉并充分干燥樹脂，理想狀態(tài)是：像干燥的沙子一樣，不容易占到其它物體的表面，例如瓶子或者紙。

四、切割液的選擇與配置

這方面資料在網上也有很多，針對不同的多肽序列，選擇不同的切割液種類。

這里主要列幾種常見的切割液比例。

1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5：5：2.5：2.5：2.5

前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種都可以使用。（每1g樹脂加8ml左右的切割液）

當然還有很多特殊的切割方法，會大大提高產物收率，具體的問題，可以聯系小編13355716090（微信手機同號）

五、切割過程

一般時間在2.5小時左右，要不斷地震動，溫度為室溫。

有些多肽很容易氧化或變質，還需要排除容器內的空氣(用氮氣代替)，有時還需要適當降低環(huán)境溫度，比如0-10℃。

六、抽濾器收集濾液

抽濾的方法很多，每個實驗室都有自己的方法，小編主要說下，這是的濾液里面含有被切割下來的多肽和一部分側鏈保護基團。一些不溶于TFA的保護基團，例如Pbf，是一種白色漂浮物，同樹脂一起被過濾掉了。

七、沉淀，離心，洗滌

小編認為 這個步驟是最影響收率的一步，處理不好的話，就會損失很多 多肽。

1）溶劑：沉淀用的是冰乙醚，這里的冰字是要求 乙醚的溫度要很低，例如放置在-20攝氏度的冰箱里面。當然使用常溫的乙醚，也是可以的。乙醚和濾液的體積比為6：1比較合適。

2）儀器：能達到3000轉每分鐘的離心機

3）方法：在時間允許的情況下，小編建議 把濾液往6倍體積的冰乙醚慢慢地滴加，可以用磁力攪拌器攪拌冰乙醚。目標是讓剛加進去的濾液立刻析出多肽。

4）離心：把已經析出，變白的溶液離心即可。

5）洗滌：一般建議洗滌3次，每一次都要把溶液攪拌均勻。

八、抽干，得到粗品肽

離心3次之后的肽，各種側鏈保護基團基本被乙醚洗滌了，這時只要將濕的多肽放到 真空釜 抽干即可。（別放恒溫箱里面）

我相信如果你按照上面的步驟一步一步來，你一定會得到理想的回報。因為很多多肽都有自己的特殊性，如果遇到一些特殊情況，可以隨時聯系小編。